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生物安全柜检测标准

发布时间:2020-11-04 00:33  

  生物安全柜是为操作原代培养物、菌毒株以及诊断性标本等具有感染性的实验材料时,用来保护操作者、实验室环境以及实验材料,使其避免暴露于操作过程中可能产生的感染性气溶胶和溅出物而设计的。

  Ⅰ级生物安全柜从前窗开口区向内吸入的负压气流用以保护人员的安全,排出气流经HEPA过滤器过滤排出以保护环境。

  Ⅰ级生物安全柜特点如下:①工作空间前开口处有定向的流入的气流,流速0.7~1.0m/s;②在负压状态下工作;③出风经过HEPA过滤器过滤,可向实验室内排出。

  Ⅱ级生物安全柜从前窗开口区向内吸入具有一定速度的气流,保护操作者;垂直的、无颗粒的层流气体保护工作区内的样品不会受到交叉感染;排出气体经HEPA过滤器过滤以保护环境。Ⅱ级生物安全柜细分为A1、A2、B1、B2型。

  Ⅱ级生物安全柜特点如下:①工作空间前开口处有定向的流入的气流;②经HEPA过滤器过滤后,有向下层流气流;③在负压状态下工作;④出风经过HEPA过滤器过滤排出。

  Ⅲ级生物安全柜特点如下:①无气流流入口,当去掉单只手套后手套连接口的气流流速不低于0.7m/s;②至少在120Pa的负压下工作;③出风需经过双HEPA过滤器或经过一道HEPA过滤器过滤再经焚烧处理,可向实验室内排风。

  压力衰减法测试:将生物安全柜的前窗和排风口封闭,柜体内加压到500Pa,保持30min后,测试柜内气压,防泄漏性能良好的生物安全柜内压不低于450Pa。

  肥皂泡法测试:将生物安全柜的前窗和排风口封闭,沿生物安全柜压力通风系统的所有焊缝、套接处和封口处的外表面喷或涂刷肥皂溶液,同时柜内加压到500Pa,观察否有气泡产生,如果发生大的泄漏,可通过轻微的气流感觉和声音发现。

  压力衰减法使用压力计或压力传感器系统测试,可以定量的检测柜体的密闭性,是测试柜体防泄漏Z准确、要求Zgao的一种测试方法。肥皂泡法测试效果不如压力衰减法精确可靠。

  高效过滤器主要起到过滤细菌、气溶胶和灰尘颗粒的作用,净化吹入生物安全柜工作区和排放出的气体。高效过滤器的完整性是生物安全柜检测的Z重要的指标。

  高效过滤器的检测需要气溶胶发生器和光度计2个专用设备。气溶胶发生器用以产生气溶胶颗粒,光度计用以测试高效过滤器的过滤效率。

  运行生物安全柜,去掉过滤器的散流装置和保护盖,安放气溶胶发生器,将气溶胶(其光散射强度至少应等于10μg/LDOP产生的光散射强度)导入生物安全柜,产生均匀分布的高效过滤器上游气流。

  光度计探头在过滤器下游距过滤器表面不超过25mm,以小于50mm/s的扫描速率移动,使探头扫测过滤器的整个下游一侧和每个组合过滤片的边缘,扫测路线应略微重叠。围绕整个过滤器外围,沿组合过滤片和框架的连接处以及围绕过滤器和其他部件之间的密封处仔细扫测。所有检测点的漏过率不超过0.01%。

  对于经管道排气的生物安全柜,在下游气流的管道上钻一个直径大约10mm的孔,将带有硬管光度计探针插入孔中进行检测。检测点的漏过率不大于0.005%。

  打开生物安全柜的风机和照明灯,使用声级计测量生物安全柜前面中心水平向外300mm、工作台面上方380mm处噪声;关闭风机和照明灯,测量相同位置背景噪声。生物安全柜的噪声不超过67dB。

  在生物安全柜工作台面上,沿台面两内侧壁中心连设置照度测量点,测量点之间的距离不超过300mm,与侧壁Z小距离为150mm;关掉生物安全柜的灯,使用照度计从一侧起依次在测量点测量背景照度,平均背景照度应在(110±50)lx;打开生物安全柜的灯,启动风机,依次在测量点测量照度。生物安全柜平均照度不应小于650lx,每个照度实测值不小于430lx。

  将振动仪的传感元件固定在工作台面的几何中心。测量生物安全柜正常工作时的总振动振幅。关闭生物安全柜的风机(室外风机工作),测定背景振动振幅。生物安全柜在频率10Hz和10kHz之间的净振动振幅(总振动振幅减背景振动振幅)不超过5μm。

  人员保护有2种检测方法:微生物法和碘化钾法。微生物法需制备枯草芽孢、杆菌芽孢,测试后要经过细菌培养,操作复杂,用时较长,不便于外出开展检测。碘化钾法是定义在EN12469上的,测试方法与微生物法相同,用碘化钾代替了细菌,可当场验证生物安全柜污染控制性能,操作性强,用时较短。

  将盛有5×108/mL~8×108/mL的芽孢悬浮液的喷雾器放在生物安全柜内,喷雾器喷嘴的轴线mm处,喷嘴前端位于前窗操作口内100mm处,喷雾方向平行于台面且正对操作口;喷雾器的圆筒固定在台面上的中心,一端贴住工作区的后壁,另一端从操作口伸出生物安全柜至少150mm,圆筒的轴线个撞击采样器呈左右对称放置在柜前,6个采样口正对生物安全柜;1个阳性对照琼脂培养皿放在圆筒下;2个狭缝采样器的采样口平面与台面平行,采样口的垂直轴线mm;启动喷雾器,运行5min。测试持续30min。

  在无菌的条件下,用滤膜滤取所有撞击采样器的采样液体,将滤膜置于培养基上;有滤膜的培养基、对照培养皿和狭缝采样器的培养皿在37.0℃培养。培养到24~28h时检查计数,如果呈阴性,继续培养至总培养时间达44~48h时检查计数。

  Ⅱ级生物安全柜用枯草芽孢杆菌芽孢进行实验,从全部撞击采样器收集的芽孢菌菌落数应不超过10CFU/次,狭缝采样器的培养皿收集的芽孢菌菌落数应不超过5CFU/次,对照皿应阳性(>

  300CFU)。

  将气雾发生器放置在生物安全柜的工作台面上,使气雾发生器圆盘的中心位于仪器模拟臂的中心上,圆盘的边缘到生物安全柜平面开口的距离是100mm,圆盘与生物安全柜开口上边缘平行。气雾发生器产生雾状的KI微小液滴,生物安全柜外模拟臂上的4个空气采样器采集从生物安全柜内逃逸出的KI微粒。采样结束后,取出采样器内的过滤薄膜,将薄膜放到PdCl2溶液中显色,计数薄膜上灰棕色的小圆点。

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